微生物学实验室----微生物综合实验

周学时

16

总学时

48

 学分

1．5

教学对象（本课程适合的专业和年级）：

本课程适合生物技术专业，生物科学专业，生命科学与技术基地班的2－3年级本科生。生物制药专业、环境生物学专业、生态学专业等

预备知识：

要求具备无机及有机化学、分析化学、生物化学、微生物学、微生物生理学、微生物遗传学，现代真菌学及现代生物学技术理论并具备基础微生物实验操作技能。

课程在教学计划中的地位作用：

微生物综合实验是取之于原核及真核材料,用现代生物学手段在分子水平上研究微生物结构与功能的实践课程，它以其独特的实验方法和技术，并结合现代分子生物学方法、遗传学方法等技术交叉应用，已成为生命科学研究中必不可少的技术和手段，所以微生物综合实验技术在生命科学的发展中占据着突出的位置。它是现代生物学技术的重要基础又是微生物教学的重要环节，是高素质生物人才必须掌握的实验技术。

微生物综合实验是生命科学学院生物技术专业和生科专业，基地班的选修课。通过本课程的学习使学生得到有关微生物领域中实验技能的训练；进一步加深对微生物生理学、微生物遗传学，现代真菌学基础理论的理解；在实验中进一步提高学生的科学素养和创新能力。

课程的基本要求：

本课程的目的是使学生通过学习并掌握现代微生学实验技术，加深对理论课的理解，不仅巩固已经学过的实验技能，而且提高学生独立进行微生物遗传学及生理学、真菌学实验设计与操作能力。本课程要求进行课前预习、课上认真听讲、通过课前预习和课上老师讲授、以学生为主体，要求学生实验从配制试剂开始，转接菌种，菌体培养，实验步骤的操作一直到得出实验结果的整个全过程，都由学生自主独立完成实验，课后认真总结分析讨论，并书写实验报告。通过本课程掌握现代微生物学实验技术及提高科研和创新能力。

课程内容及学时分配：

实验项目一   啤酒酵母菌2µDNA的分离提取。（10学时）

实验内容：   啤酒酵母菌的培养、试剂的配制，及啤酒酵母菌2µDNA的分离提取。

实验技术：   啤酒酵母菌2µDNA等的生物大分子分离技术。

主要仪器设备：冷冻离心机，水浴锅，培养箱，摇床，移液器等.

实验项目二   琼脂糖凝胶电泳检测DNA及定量分析

实验内容：分离提取的生物大分子（DNA）的琼脂糖凝胶电泳检测，DNA的紫外分光光度法含量测定。

实验技术：凝胶电泳技术，紫外分光光度法分析技术。

主要仪器设备：电泳仪、电泳槽、紫外分光光度计、水浴锅

（2学时）

实验项目三  λ噬菌体DNA的限制性内切酶消化片段分析

（4学时）

实验内容：内切酶消化反应、琼脂糖凝胶电泳分离λDNA的限制性内切酶消化片段并分析。

实验技术：掌握绘制DNA的限制性内切酶图谱等基因工程技术。

主要仪器设备：微型电泳槽、恒压电泳仪、手提式紫外检测仪、可调式微量进样器等

实验项目四、T4噬菌体基因组γII区域不同基因突变的互补

（16学时）

实验内容：T4噬菌体基因组γII区域基因精细结构分析及其不同突变的互补。

实验技术：利用噬菌体研究技术－双层平板法备裂解液和测效价。

主要仪器设备：离心机，水浴，移液器等等。

实验项目五、   真菌形态及各类孢子的观察（4学时）

实验内容:  (1)真菌的营养体——菌丝及其变态组织

(2)真菌繁殖体——各种孢子的观察

实验技术：巩固显微镜使用技术，掌握观察真菌形态制备真菌水封片、小室培养的方法。

主要仪器设备：显微镜、恒温培养箱、载玻片、U型玻棒、培养皿等。

实验项目六  丝状真菌生长的测定（4学时）

实验内容： (1)菌丝顶端延长生长的测定

(2)菌落生长速度的测定

实验技术：学习和掌握测定丝状真菌生长的方法，掌握丝状真菌顶端延长生长的机理

主要仪器设备：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、培养皿、接种针、直尺、，“U”形培养管等。

实验项目七  PCR扩增少根根霉△6—脂肪酸脱氢酶基因

（10学时）

实验内容：少根根霉总DNA的提取及检测

PCR扩增少根根霉△6-脂肪酸脱氢酶基因

实验技术： (1)、学习和掌握CTAB法提取丝状真菌总DNA的方法与技术。

(2)、掌握聚合酶链式反应的操作技术。

(3)．学习从真核微生物少根根霉的总DNA中扩增△6-脂肪酸脱氢酶基因，为△6-脂肪酸脱氢酶基因克隆提供实验材料的方法。

主要仪器设备：冷冻台式离心机、恒温振荡器、水浴锅、751紫外分光光度计、PCR仪、微型电泳槽、恒压电泳仪、手提式紫外检测仪、可调式微量进样器、液氮罐等。

实验项目八   苏云金芽孢杆菌ICP基因检测

（实验九至十是学生自我设计实验、实验室开放、每2-4人一组选作实验项目）

实验项目九   △6—脂肪酸脱氢酶基因的克隆（选做，开放）

实验项目十    正交试验法对黄原胶发酵培养条件的选择与优化（选做，开放实验）

教

材

名称：《微生物学实验》

作者：杨文博

出版日期：2004年

出版社：化学工业出版社，

获奖情况：

使用情况：正在使用

主要参考书

《微生物遗传学与实验技术》，王岳五、陈宁，南开大学出版社。

《基因工程实验技术》，彭秀玲、袁汉英，湖南科学技术出版社。

《微生物生理代谢实验技术》，焦瑞身、周德庆，科学出版社。

《现代分子生物学实验技术》，卢圣栋，高等教育出版社

《 普通真菌学》，邢来君，李明春，高等教育出版社。

本大纲的特色（在教学内容、方法、手段方面改革的情况）：

本大纲以新编《微生物学实验》为教材，在教学内容上为了充分及时反映生命科学领域的最新科研成果与科学发展前沿接轨。微生物综合实验教学体系是在我院科研平台的基础上构建的，所开设的每个实验都是根据各研究室和课题组承担的研究项目转化而来。经过几年来的不断地改革和创新，我们将科研项目中实验技术与方法有机的整合到的微生物综合实验中，对实验课程内容进行了精选、重组和更新，有分子微生物学技术又有基因工程发展前沿性内容，结合了遗传学等手段 强调实验的综合性、探索性、研究性和连贯性.实验内容由单一的验证性实验向综合性、设计性、应用性实验转变.以微生物生理学和遗传学实验、现代真菌学实验内容为主，同时向学生介绍该领域的最新实验技术；在教学方法上多种形式相结合，充分发挥学生自身的潜质，通过课前预习、课上实验从配制试剂开始一直到得出结果的整个全过程都由学生独立完成、课后总结分析实验结果，书写报告，锻炼其思考和积极动手的能力；在教学手段上配合传统的教学方式，辅以计算机多媒体教学，加深学生对实验内容的理解并提高他们对实验课的兴趣。