细胞与遗传学实验室----细胞生物学实验

周学时

   2

总学时

32

 学分

  1

教学对象（本课程适合的专业和年级）：

    本实验课教学对象为本科生物科学，生物技术和生物科学与技术基地班等专业二年级学生和七年制医学及中医医学专业预科班二年级学生（六个医予班）。

预备知识：

    本课程属生命科学学院公共必修课（B类）。有机化学，动物学实验，植物学实验，微生物学实验和生物化学实验等课程为本实验课的先修课程。

课程在教学计划中的地位作用：

    细胞生物学实验课是一门从细胞，亚细胞及分子水平上研究生命活动实验课程。是生物学科中的基础学科。`通过本实验课程的学习，使学生掌握细胞生物学实验的基本原理，方法和技术。培养学生对生命科学的客观观察和思考能力，有助于学生巩固和加深对理论知识的理解和掌握。并为生命科学及相关科学专业的学生进行专业基本实验技术及良好的科研素质和创新能力培训奠定良好基础。

课程的基本要求：

   要求上实验课的同学做到：

1. 做好课前预习、书写预习报告，上课时放于实验台上，以备任课教师检查，并将预习报告与实验报告一同上交教师批阅。

2. 提前5分钟左右进入实验室，认真检查和核对实验用具。

3. 严格按照实验操作规范进行各项实验环节检查，保持良好的实验秩序。

4.按科技论文格式认真书写实验报告。

5. 严格按照规范操作要求正确使用实验仪器和实验用具，如发现有问题或破损器具，应及时告知任课教师，并如实填写物损登记。

6. 保持良好课堂秩序、维护环境卫生，并严格坚持卫生值日制度。保障水电门窗等的实验室安全。

课程内容及学时分配：

实验项目一  细胞器的显微观察(必做，基础)       (3学时)

实验内容:  细胞核、核仁、线粒体、高尔基体、中心体等

重要细胞器的基本形态观察。

实验技术: 显微镜的正确使用, 多种细胞器的形态识别。

主要仪器设备：显微镜、动物植物组织(或器官)永久制片。

实验项目二  细胞化学（必做，综合）           （4学时）

实验内容: 1.多糖的细胞化学显示方法。

2.过氧化物酶的细胞化学显示方法。

实验技术: PAS反应检测多糖，联苯胺反应检测过氧化物酶。

主要仪器设备: 显微镜、水浴锅、冰箱、吹风机

实验项目三 细胞融合、凝集和人性染色质制备与分析

（必做，综合）                     （6学时）

实验内容:  血细胞融合和凝集； Barr小体制片技术和观察

识别。

实验技术:  抽取鸡血,收集细胞并加入诱导剂,使两个或多

个细胞融合,形成双核或多核的细胞,显微镜检查；兔静脉取血,收集细胞并清除内源凝集素,加入外源凝激素诱导细胞凝集；人口腔粘膜涂片、染色、油镜下观察。

实验项目四 细胞活体染色（必做，综合）        （4学时）

实验内容: 线粒体的活体染色

实验技术: 兔肝脏和洋葱鳞茎表皮离体活体染色,油镜下观

察线粒体的形态和运动状态。

主要仪器设备: 显微镜、冰箱

实验项目五  Feulgen反应显示DNA（必做，综合）（4学时）

实验内容: 经Feulgen反应使细胞核、核仁、细胞质显示着

色不同,以便识别和区分。

实验技术: 大蒜根尖培养、固定、解离、染色和复染,显微观

察。

主要仪器设备: 显微镜、冰箱、水浴锅

实验项目六 Unna反应鉴定两种核酸（DNA、RNA）在细胞内的分布（必做，综合）          （4学时）

实验内容: 经Unna反应使两种核酸（DNA  RNA）显示不

同颜色,对其在细胞内的分布情况进行检测。

实验技术: 利用复合染液染色、镜检。

主要仪器设备: :显微镜、冰箱

实验项目七  蛋白质细胞化学显示方法（必做，综合）

（4学时）

实验内容:对细胞内碱性蛋白和酸性蛋白分布进行检测。

实验技术:利用低于两种蛋白等电点和高于酸性蛋白且低于

碱性蛋白等电点的pH值条件染色,镜检。

主要仪器设备: 显微镜、冰箱

实验项目八 植物细胞骨架的制备及显微观察（必做，基础）

（4学时）

实验内容: 制备植物细胞骨架标本制片,观察细胞骨架形态。

实验技术: 将实验材料用Triton X-100处理、固定、染色、

镜检。

主要仪器设备: 显微镜、冰箱

实验项目九 细胞有丝分裂和减数分裂的显微观察

（必做，综合）                  （8学时）    

实验内容: 1.植物有丝分裂标本制备,细胞分裂过程,各分裂

染色体形态特征和和动态变化。

2.植物减数分裂标本制备小孢子发育过程, 细

胞分裂过程,各分裂期染色体形态特征和和动态

变化。

实验技术: 1.材料培养、取材固定、解离、制片、镜检

       2.材料培养,取材固定、压片、镜检

主要仪器设备: 显微镜、冰箱、水浴锅

实验项目十  细胞凋亡（选做，综合）         （6学时）

实验内容 :荧光探针标记,荧光显微镜检测凋亡细胞

实验技术:细胞株培养, :荧光探针碘化丙啶(PI)和 Ho.33342双标记,荧光显微镜检测凋亡细胞

主要仪器设备: CO₂培养箱、荧光显微镜、离心机

实验项目十一  细胞核与线粒体的分级分离（选做，综合）

（8学时）

实验内容 ,细胞核与线粒体的分级分离技术和形态观察

实验技术: 将材料匀浆,差速离心、染色、制片镜检

主要仪器设备：显微镜、低温高速离心机、冰箱、匀浆器

实验项目十二  叶绿体的分离（选做，综合）    （6学时）

实验内容: 叶绿体的分离技术和形态观察

实验技术: 将材料匀浆、差速离心、显微观察

主要仪器设备: 显微镜、低温高速离心机、组织捣碎机

实验项目十三  原位杂交（选做，综合）      （18学时）

实验内容：人类rDNA定位

实验技术：标本制备、荧光原位杂交、镜检

主要仪器设备: 荧光显微镜、离心机、冰箱、杂交箱、水浴锅。

教

材

名称：细胞生物学实验指导

作者：南开大学生命科学学院细胞生物学课程组

出版日期：

出版社：

获奖情况：

使用情况：

较好

主要参考书

细胞生物学实验教程 王金发等主编  科学出版社

细胞生物学实验教程 安利国主编  科学出版社

细胞生物学实验指导  李素文主编  高等教育出版社

生命科学实验技术   郝福英主编  北京大学出版社

本大纲的特色（在教学内容、方法、手段方面改革的情况）：

本大纲的内容为2005-2006年度第二学期为生科院本科生和六个医预班二年级学员开设的实。本实验课是生命科学的重要基础学科，在实验内容安排中既兼顾了细胞生物学基础性所必须的基本验证性实验技术（Feulgen反应显示DNA，PAS反应检测多糖等），同时又包含了一些新的现代生物学方法与技术（细胞凋亡，原位杂交等）。

   为了加强学生基础实验的动手能力和创新的培养，课程组在教学中改变原来因课时数限制，实验的前处理和实验材料培养等一些实验环节由教师完成的方式，通过加班和全天开放实验室，千方百计弹性式地安排学生完成完整实验内容。最大限度地解决目前存在的本科生实验中开设高水平和创新性实验与教学课时严重不够的矛盾。